Specifikace
| Označení | VIP (vazoaktivní intestinální peptid) |
| Sekvence | Přirozený peptid o 28 aminokyselinách |
| Molekulová hmotnost | ≈3,33 kDa |
| Forma | Lyofilizovaný prášek |
| Síla na lahvičku | 10 mg |
| Obsah krabičky | 10 lahviček se stejnou silou |
| Čistota | ≥99 % (HPLC) |
Receptory VPAC a dráha cAMP
VIP je endogenní neuropeptid o 28 aminokyselinách, který výzkum charakterizuje přes receptory VPAC1 a VPAC2. Oba podtypy patří do rodiny sekretinu receptorů spřažených s G proteinem a spřahují se přes Gs. Vazba agonisty zvyšuje cytoplazmatické cAMP a aktivuje proteinkinázu A. VIP a PACAP sdílejí část tohoto receptorového profilu, proto vazebné a funkční testy často vedou oba ligandy souběžně. V modelech tenkého střeva, nervu a imunitních buněk exprimují linie receptory VIP v různé hustotě. Syntetický peptid tyto kaskády zrcadlí v kontrolovaných in vitro systémech a slouží jako referenční agonista aktivity adenylátcyklázy a navazující genové exprese. Týmy, které chtějí koupit VIP, volí vazoaktivní intestinální peptid v množství 10 mg na lahvičku.
Rekonstituce a zacházení
Lyofilizovaný prášek VIP se v laboratoři rekonstituuje vhodným sterilním rozpouštědlem. Rozpouštědlo se přidává pomalu podél stěny nádoby a přípravek se pak šetrně promíchá, dokud se peptid zcela nerozpustí. V roztoku je VIP citlivější na okolní podmínky, proto další práce probíhá bez prodlevy. Do použití se činidlo drží mimo přímé světlo. Koncentraci a objem stanoví laboratoř ve vlastním protokolu. Tento popis neurčuje pevné objemy ředění.
In vitro aplikace
Ve výzkumu in vitro je VIP referenčním ligandem v kompetitivních vazebných testech na VPAC1 a VPAC2 a v testech akumulace cAMP, které kvantifikují agonistickou potenci vůči dalším ligandům rodiny sekretinu. Neuronální a gliové kultury používají VIP ke sledování synchronizovaných buněčných odpovědí, signálů neuroprotekce a uvolnění zánětlivých mediátorů po peptidové stimulaci. Imunitní a epitelové modely používají VIP ke sledování parametrů závislých na MAPK a cAMP. Dobrá rozpustnost lyofilizátu po rekonstituci usnadňuje definované ředicí řady pro křivky koncentrace-odpověď v testech druhých poslů a reportérových genů.
Kvalita a analytika
Každá šarže se zkouší metodou HPLC na obsah peptidu a čistotu. Čistota činí ≥99 %. Kontrola identity potvrzuje kostru molekuly o 28 aminokyselinách. Výsledky se zaznamenávají po šaržích a platí pro nabízenou sílu 10 mg. Tento analytický profil dává spolehlivý základ pro reprodukovatelná vazebná data a paralelní série měření cAMP v laboratoři.