Пептидите са къси вериги от аминокиселини между класическите активни вещества и антителата: достатъчно големи за специфична биологична активност, достатъчно малки за възпроизводим синтез.
20-те канонични аминокиселини образуват речника на всяка естествена пептидна последователност. Всяка от тях има общ гръбнак и се различава по страничната си верига.
Нестандартни градивни елементи като D-аминокиселини, Hyp или Aib разширяват стабилността, времето на полуживот и контрола върху конформацията.
Образуват хидрофобното ядро; Pro прекъсва α-спирали и стабилизира β-завои.
π-стакинг и UV-абсорбция при 280 nm, основа на HPLC-детекцията.
Водородни връзки; Cys позволява дисулфидни мостове.
Солеви мостове и зависещо от pH протониране.
Стабилност, време на полуживот и мембранна пропускливост.
Пептидната връзка възниква чрез кондензация на α-COOH групата с α-NH₂ групата на следващата аминокиселина. Плоският амиден гръбнак определя конформацията.
Двустенните ъгли Φ и Ψ определят вторичната структура. Диаграмата на Рамачандрана визуализира допустимите комбинации.
Защитава терминалите от разграждане от екзопептидази.
Протеазите не разпознават D-конфигурацията на местата на разцепване.
Свързване „глава към опашка“ или дисулфидни мостове стабилизират структурата.
Мастнокиселинните котви удължават времето на полуживот чрез серумен албумин.
Синтезът на пептиди в твърда фаза (SPPS) закрепва растящата верига към полимерна смола. При всеки цикъл: отстраняване на защитната група и свързване на следващата Fmoc-аминокиселина.
Първа аминокиселина върху Wang- или Rink-амидна смола. Плътност на натоварването 0,2–0,8 mmol/g.
Отстраняване на Fmoc с пиперидин в DMF.
Активиране с HBTU/HATU или DIC/Oxyma.
Отцепване от смолата с TFA и отстраняване на защитните групи на страничните вериги.
Твърда фаза: последователността се изгражда върху смолата.
Мащаб от грамове до килограми.
Затваряне на пръстена за стабилност.
Конфигурация, устойчива на протеази.
Свързване с албумин и удължаване на полуживота.
Конюгат лекарство-албумин чрез Cys-Maleimid.
RP-HPLC върху C18 за определяне на чистотата.
Лиофилизиран под защитен газ.
Хроматографията, масспектрометрията, контролът на тежки метали и микробиологичната безопасност дават пълна картина на партидата.
Обратна фаза с UV-детекция за чистота и идентичност.
Молекулна маса и фрагментация.
Тежки метали на ниво ppb.
Микробиологична безопасност съгласно USP.