Specyfikacja
| Nazwa | VIP (wazoaktywny peptyd jelitowy) |
| Sekwencja | Naturalny peptyd o 28 aminokwasach |
| Masa cząsteczkowa | ≈3,33 kDa |
| Postać | Liofilizowany proszek |
| Dawka na fiolkę | 10 mg |
| Zawartość pudełka | 10 fiolek o identycznej dawce |
| Czystość | ≥99 % (HPLC) |
Receptory VPAC i szlak cAMP
VIP to endogenny neuropeptyd o 28 aminokwasach, charakteryzowany w badaniach przez receptory VPAC1 i VPAC2. Oba podtypy należą do rodziny sekretyny receptorów sprzężonych z białkiem G i sprzęgają się przez Gs. Wiązanie agonisty podnosi cytoplazmatyczne cAMP i uruchamia kinazę białkową A. VIP i PACAP dzielą część tego profilu receptorowego, dlatego testy wiązania i funkcji często prowadzą oba ligandy równolegle. W modelach jelita cienkiego, nerwu i komórek odpornościowych linie wyrażają receptory VIP w różnym nasileniu. Syntetyczny peptyd odtwarza te kaskady w kontrolowanych układach in vitro i służy jako agonista referencyjny aktywności cyklazy adenylanowej oraz późniejszej ekspresji genów. Zespoły, które chcą kupić VIP, wybierają wazoaktywny peptyd jelitowy w dawce 10 mg na fiolkę.
Rekonstytucja i obchodzenie się
Liofilizowany proszek VIP rekonstytuuje się w laboratorium odpowiednim sterylnym rozpuszczalnikiem. Rozpuszczalnik dodaje się powoli wzdłuż ścianki naczynia, a następnie preparat delikatnie miesza, aż peptyd rozpuści się całkowicie. W roztworze VIP jest wrażliwszy na warunki otoczenia, dlatego dalszą pracę prowadzi się od razu. Do użycia odczynnik trzyma się z dala od bezpośredniego światła. Stężenie i objętość ustala laboratorium we własnym protokole. Ten opis nie narzuca stałych objętości rozcieńczeń.
Zastosowania in vitro
W badaniach in vitro VIP jest ligandem referencyjnym w kompetycyjnych testach wiązania VPAC1 i VPAC2 oraz w testach akumulacji cAMP, które określają siłę agonisty wobec innych ligandów rodziny sekretyny. Hodowle neuronalne i glejowe stosują VIP, aby śledzić zsynchronizowane odpowiedzi komórek, sygnały neuroprotekcji i uwalnianie mediatorów zapalnych po stymulacji peptydem. Modele immunologiczne i nabłonkowe stosują VIP do odczytów zależnych od MAPK i cAMP. Dobra rozpuszczalność liofilizatu po rekonstytucji ułatwia określone szeregi rozcieńczeń do krzywych stężenie-odpowiedź w testach wtórnych przekaźników i genów reporterowych.
Jakość i analityka
Każdą partię bada się metodą HPLC pod kątem zawartości peptydu i czystości. Czystość wynosi ≥99 %. Kontrola tożsamości potwierdza szkielet cząsteczki o 28 aminokwasach. Wyniki zapisuje się dla partii i dotyczą oferowanej dawki 10 mg. Ten profil analityczny wspiera powtarzalne dane wiązania i równoległe serie pomiarów cAMP w laboratorium.